Una técnica que se utiliza para identificar y localizar secuencias de ADN en una mezcla compleja y que son complementarias a otro fragmento de ADN llamado sonda.
La técnica de hibridación o southern blot denominada así en honor a quien la desarrollo en 1975, se emplea para identificar fragmentos específicos de ADN en una mezcla compleja. Inicialmente se digiere el ADN que queremos estudiar con una o más encimas de restricción, las cuales cortan en puntos específicos de la secuencia, generando fragmentos de varios tamaños. Seguidamente, estos fragmentos se separan por su tamaño en una gel de agaroza empleando corriente eléctrica y luego se transfieren a una membrana de nylon. Para la detección del fragmento de interés en la membrana, utilizamos otro fragmento de ADN o ARN que se llama sonda y que contiene la secuencia complementaria al fragmento que queremos identificar. La sonda, se marca con un isótopo radiactivo, se agrega a una solución y se incuba con la membrana por varias horas. Este hibridización, hace que las sonda se adhiera la fragmento de ADN en la membrana el cual contiene las bases complementarias. Al exponer la membrana a una película de fotografía, podemos identificar el fragmento y establecer así si está o no está contenido en el ADN que estamos estudiando.
La técnica de hibridación o southern blot denominada así en honor a quien la desarrollo en 1975, se emplea para identificar fragmentos específicos de ADN en una mezcla compleja. Inicialmente se digiere el ADN que queremos estudiar con una o más encimas de restricción, las cuales cortan en puntos específicos de la secuencia, generando fragmentos de varios tamaños. Seguidamente, estos fragmentos se separan por su tamaño en una gel de agaroza empleando corriente eléctrica y luego se transfieren a una membrana de nylon. Para la detección del fragmento de interés en la membrana, utilizamos otro fragmento de ADN o ARN que se llama sonda y que contiene la secuencia complementaria al fragmento que queremos identificar. La sonda, se marca con un isótopo radiactivo, se agrega a una solución y se incuba con la membrana por varias horas. Este hibridización, hace que las sonda se adhiera la fragmento de ADN en la membrana el cual contiene las bases complementarias. Al exponer la membrana a una película de fotografía, podemos identificar el fragmento y establecer así si está o no está contenido en el ADN que estamos estudiando.
http://www.conocimientosweb.net/portal/term1578.html
TRANSFERENCIA (BLOTTING)
La técnica de transferencia (blotting) se basa en el mismo fundamento que la autorradiografía, y permite identificar la presencia de una banda concreta en un gel de electroforesis, bien sea de proteínas o de ácidos nucleicos:
http://www.ehu.es/biomoleculas/isotopos/blot.htm
Northern blot
Una técnica de laboratorio que se utiliza para identificar y localizar las secuencias de ARNm que son complementarias a un fragmento de ADN o ARN llamado sonda.
Northern blot o análisis Northern es básicamente una prueba para detectar la presencia del ARN mensajero en un tejido en particular y la cual permite también determinar el tamaño de la trascripción de ese ARN mensajero. El procedimiento se hace transfiriendo todo el ARN mensajero de un tipo determinado de tejido desde un gel a una membrana de nylon o nitrocelulosa. La presencia de un ARN en particular se detecta hibridizando esta membrana con una sonda de ácido nucleico, generalmente de cADN o rARN del gen de interés.
http://www.conocimientosweb.net/portal/term1542.html
 
Northern blot
Una técnica de laboratorio que se
utiliza para identificar y localizar las secuencias de ARNm que son
complementarias a un fragmento de ADN o ARN llamado sonda.
Northern blot o análisis Northern es básicamente una prueba para detectar la presencia del ARN mensajero en un tejido en particular y la cual permite también determinar el tamaño de la trascripción de ese ARN mensajero. El procedimiento se hace transfiriendo todo el ARN mensajero de un tipo determinado de tejido desde un gel a una membrana de nylon o nitrocelulosa. La presencia de un ARN en particular se detecta hibridizando esta membrana con una sonda de ácido nucleico, generalmente de cADN o rARN del gen de interés.
Northertn Blot:
Es similar a la técnica anterior, pero permite detectar RNA
en vez de DNA (Innis yGelfand, 1990). En síntesis la técnica consiste en
extraer el RNA de las células pertinentes y suposterior separación por tamaño
mediante electroforesis en gel. Las moléculas de RNA sontransferidas y unidas
al filtro, al igual que en el Southern blot. Después de la hibridación con
unasonda marcada (y posterior a la detección según el método de marcaje utilizado),
las bandas en elgel indican la ubicación de los tipos de RNA que sean
complementarios a la sonda. Teniendomarcadores de RNA de tamaño adecuado, se
puede conocer el tamaño de los RNA que se hanidentificado. Así, la técnica
permite conocer el tamaño preciso de un mRNA, luego del empalmetranscripcional.
Además, sirve para identificar diferentes tipos de mRNA codificados por un
mismogen y para determinar la cantidad y el tejido específico (o tipo de
células) en que se encuentra unmRNA específico. Así, será posible determinar
los niveles de actividad génica, por ejemplodurante el desarrollo, o bien en
distintos tejidos (o tipos celulares) durante un período definido dela vida, o
después de haber sido sometido a los organismos a diferentes estímulos fisiológicos
(Russel, 1998).El
Northern Blot
es una técnica muy similar al Southern Blot que permite la
identificación desecuencias específicas de RNA.La muestra de RNA a analizar no
requiere fragmentación y se somete a electroforesis en geles deagarosa, donde
las moléculas de RNA se separan desde mayor a menor tamaño.Una vez terminada la
electroforesis, y sin teñir el gel, los fragmentos se traspasan a un filtro
denitrocelulosa ó a una membrana nylon, luego el filtro se incuba con una sonda
marcada, específicapara la secuencia que se desea identificar.Esta sonda es una
secuencia de ácido nucleico, por ejemplo cDNA, que reconocerá a la secuencia
deRNA inmovilizada en el filtro, a través del reconocimiento de secuencias
complementarias de ácidosnucleicos.El nombre de la técnica deriva por analogía
al Southern Blot.
http://es.scribd.com/doc/7176351/Southern-Northern-Western-Blot
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